目的：研究Foxo3a基因?qū)Υ笫舐殉差w粒細(xì)胞體外發(fā)育的調(diào)控及其預(yù)防順鉑卵巢毒性作用。

　　方法：大鼠原代顆粒細(xì)胞體外 培養(yǎng)，利用HE染色法及免疫熒光法進(jìn)行原代顆粒細(xì)胞鑒定；構(gòu)建攜帶Foxo3a基因的重組腺病毒AD-rFoxo3a，利用RT-PCR及 Western-blot法檢測Foxo3a表達(dá)；實(shí)驗(yàn)分為3組：實(shí)驗(yàn)組（AD-rFoxo3a組）、陰性對照組（rAD組）及空白對照組（Control組），分別 繪制各組細(xì)胞生長曲線，Western-blot法檢測各組cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表達(dá)，利用流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst33342/PI法分別 檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞加入最適濃度順鉑后細(xì)胞凋亡情況。

　　結(jié)果：（1）體外分離培養(yǎng)大鼠原 代卵巢顆粒細(xì)胞存活率>90%，細(xì)胞純度>95%；（2）重組腺病毒AD-rFoxo3a感染顆粒細(xì)胞36 h后Foxo3a基因在mRNA水平高 表達(dá)，感染48 h后在蛋白水平高表達(dá)；（3）實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖受到抑制，G1期細(xì)胞比例及細(xì)胞凋亡率較空白對照組及實(shí)驗(yàn)對照組增 加（P<0.01），后兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（3）實(shí)驗(yàn)組Bim、p27、cyclin D1蛋白較對照組高表達(dá)，而各組Bax蛋白表達(dá)無明顯差異； （4）加入順鉑24 h后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率高于空白對照組及實(shí)驗(yàn)對照組（P<0.01），后兩組細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　結(jié)論：過表達(dá)Foxo3a基因在體外可能通過促進(jìn)cyclin D1和p27蛋白表達(dá)誘導(dǎo)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞靜止在G1期，通過增加Bim蛋白表達(dá) 誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡；同時(shí)過表達(dá)Foxo3a基因在體外不能逆轉(zhuǎn)順鉑導(dǎo)致的顆粒細(xì)胞凋亡，其對于卵泡發(fā)育的調(diào)控及預(yù)防順鉑對 卵巢的毒性作用還有待體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。